產品信息

產品名稱    大腸菌群平板計數成套試劑

貨      號     SP002

單      位     套；一套產品檢測一個批次的5個樣品。

包      裝     10套/箱

每套產品組成

●大腸菌群平板計數集成平板組1組   ● VRBA培養基（300mL/瓶）1瓶   ●10管組BGLB肉湯管1只

產品描述

1.大腸菌群平板計數集成平板組：每一組由5塊集成平板組成，每塊集成平板含4個方形平皿；1塊平板檢測一個樣品，5塊平板共檢測一個批次的5個樣品。自上而下依次編號為1、2、3、4、5，代表該批次5個樣品的編號，每一個樣品使用一塊集成平板，做兩個連續稀釋度，每個稀釋度兩個平皿；使用前，將該樣品的批次編號標注在集成平板組的標簽區域內，使用時依次自上而下取用集成平板，左手揭開集成平板蓋，右手持無菌吸管將樣品稀釋液加入平皿內，每加完一個樣品后蓋上集成平板蓋，依次自下而上疊加；當加完一個批次的5個樣品后，傾注平板計數培養基；傾注時依次從上而下拿取已經加好樣品的集成平板，每傾注好一塊集成平板，立即在實驗臺上前后左右平移混勻，然后自下而上疊加，待瓊脂凝固后以一組為單位翻轉過來。

2.VRBA培養基（300mL/瓶）：使用前經水浴加熱液化并恒溫至48℃備用；每瓶總量為300mL，為1組共5塊集成平板的使用量，每個平皿約15mL。

3.10管組BGLB肉湯管：用于證實試驗。使用時，左手揭開管蓋，右手持專用開孔器，經火焰消毒并冷卻（或用酒精消毒），在組合管的封膜上連續開孔；用接種環選取1組5個平板上的10個將典型和可疑菌落接種到管內，1管接種1個菌落；經培養后，產氣窗內觀察產氣情況；產氣窗內有氣泡產生者證實為大腸菌群陽性。

使用方法

1.液化培養基：取1瓶VRBA培養基水浴液加熱化后恒溫至48℃備用

2.樣品處理：

2.1.固體樣品和半固體樣品取25g于盛有225mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內經均質處理制成1:10的樣品勻液，再用樣品稀釋管做成1：100和1:1000的或更高稀釋度的連續稀釋度的樣品勻液。

2.2.液體樣品吸取25mL樣品置于有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶或其他無菌容器中充分振搖,制成1∶10的樣品勻液；再用樣品稀釋管做成1：100和1:1000的或更高稀釋度的連續稀釋度的樣品勻液。

3.加樣：用移液器吸取兩個連續稀釋度的樣品稀釋液加入集成平板內，一個稀釋度兩個平板，每個平板1mL。注：包裝飲用水采用原液和1:10兩個稀釋度檢驗。

 4. 傾注平板并培養：將液化并恒溫至48℃的VRBA培養基傾注集成平板;每個平板約15ml，然后在操作臺上將平板前后或左右移動，使培養基和樣品充分混勻，待培養基凝固后翻轉集成平板板置于 36℃±1℃ 培養 18h～24h。

 5. 菌落數選擇：選取菌落數在 15CFU～150CFU 之間的平皿,計數平皿上出現的典型和可疑大腸菌群菌落，最低稀釋度平板低于15CFU 的記錄具體菌落數。

 6. 證實試驗：從1組5個集成平板中選取10個不同類型的典型和可疑菌落（不足10個菌落，全部選?。┮来谓臃N于10管組BGLB肉湯管中，每管接種1個菌落。置于培養箱內 36℃±1℃ 培養 24h～48h后觀察產氣情況。凡產氣窗內有氣泡者為陽性管。

 7. 結果報告：經最后證實為大腸菌群陽性的管數比例（該比例數適用于該批次5個樣品的平板上的菌落數計算）乘以上述“5.菌落數選擇”中計數的平板菌落數,再乘以稀釋倍數,即為每 g(mL)樣品中大腸菌群數。例:10-3樣品稀釋液1mL,在 VRBA 平板上有100個典型和可疑菌落,挑取其中10個接種BGLB肉湯管,證實有6個陽性管,則該樣品的大腸菌群數為:100×6/10×103/g(mL)= 6.0×104CFU/g(mL)。若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。